Lancet ：AAV、LNP递送单碱基编辑器修复肝脏遗传病，且不诱发脱靶效应

长久以来，增生结核病一直是拖累人类文明的难题，无论是生活里较为常用的红绿色盲，还是拖累北美皇室数个世纪的血友病，这些因基因型缺陷而致使的结核病不仅对病变的生活造成影响，还隐忧着病变的生命安以外，更重要的是，人类文明已发现数千种增生结核病，但对其里的绝大多数仍束手无策。

许多人庆幸的是，蛋白质组学的涌现使得人类文明得以认知增生的本质——源于基因本身的基因型。基于此，如果我们很难对这些基因型的基因位点进行精准的校对，使其更换成确实的双链对，那就可以从根本上终究治愈这些人类文明增生。

基于CRISPR子系统的双链图形化就是一项极度有希望的、可运用于增生治疗的关键技术开发设计。但难过的是，一些研究成果说明了，双链图形化具有脱靶现像，意味著会对正常基因位点进行非载体的校对。如果不能解决这一疑问，双链图形化在人类文明增生治疗里的应用将延至。

2021年1月25日，瑞士苏黎世联邦麻省理工学院、苏黎世医学院以及巴塞尔医学院等一组的联合工作团队在 Nature Biomedical Engineering 杂志上发表了篇文章：In vivo cytidine base editing of hepatocytes without detectable off-target mutations in RNA and DNA 的研究成果专著。

这项研究成果通过疣无关病毒（AAV）和上皮细胞激光颗粒（LNP）两种寄送表征，分别向激素肝脏膜寄送核苷酸双链图形化（CBE），并对其进行以外核糖体组和以外基因组脱靶修饰的无偏倚统计分析。

研究成果工作人员发现，通过这两种表征寄送的核苷酸双链图形化可以重建细菌感染基因型，而才会在肝脏膜的RNA和DNA里产生脱靶基因型。这一结果支持了核苷酸双链校对治疗增生肝脏膜结核病的可行性。

有近，单双链基因型占以外部已发现的人类文明基因型结核病的大近2/3，同时也是许多海洋生物重要性状变异的基因型基础。因此，开发设计一种精准且很难高效做到单双链更换的技术开发设计就显得尤为重要，华人研究成果工作团队刘如谦（Did Liu）领导的研究成果工作团队开发设计的双链图形化就是为此而生。

核苷酸双链图形化（CBE）正是刘如谦研究室开发设计的一种双链图形化，它可以做到C？G双链对至T？A双链对的直接更换。

然而，都只的一些研究成果却说明了核苷酸双链图形化（CBE）可以在细胞膜系里致使非载体的以外核糖体组脱靶基因型，并在诱导的多能造血和两细胞膜期胚胎里致使数百个以外基因组脱靶基因型。此外，核苷酸双链图形化（CBE）里所运用于的脱氨酶——rAPOBEC1，其在血液的过强调将意味著致使激素肝脏膜发育妨碍和肝脏膜癌。

由此看来，审核核苷酸双链图形化（CBE）等双链图形化的脱靶现像以及其他妨碍现像是极度必要的。

在这项研究成果里，为了审核核苷酸双链图形化（CBE）在血液是否存在脱靶现像，研究成果工作团队重点研究成果了Pahenu2尿激素静态，并将SaKKH-CBE3双链校对子系统通过AVV抑制寄送到激素肝脏膜里。紧接着，研究成果工作团队运用于RNAPCR（RNA-Seq）对从激素肝脏膜里提取的RNA进行统计分析。

AVV抑制的SaKKH-CBE3子系统的Pahenu2激素肝脏膜寄送和脱靶现像审核统计分析

研究成果工作人员仔细观察到23%的基因型物质校对，但与在在的对照组来得，核糖体组区域的C→U的转变并没有增加。更有趣的是，当转染低剂量的SaKKH-CBE3 mRNA时，虽然与质粒转染来得，核苷酸双链图形化（CBE）强调增大了18倍，但在保留63%的目标校对的同时，还大大增大了非基因型物质基因型。

这一说明了核苷酸双链图形化（CBE）的过强调意味著与高的非基因型物质校对率关的。

CBE的过强调意味著与高的非基因型物质校对率关的

与此同时，研究成果工作团队还审核了AAV抑制的SaKKH-CBE3子系统在离开Pahenu2激素之后是否会致使基因组DNA的非基因型物质校对。以外基因组PCR（S）统计分析说明了，SaKKH-CBE3子系统并从未在激素肝脏膜里导入显著的DNA脱靶基因型。

SaKKH-CBE3子系统可以做到基因型物质校对校对，且从未造成显著的RNA和DNA非基因型物质基因型

除此之外，研究成果工作团队还通过上皮细胞激光颗粒（LNP）寄送SaKKH-CBE3 mRNA和无关的sgRNA。他们的研究成果说明了，在上皮细胞激光颗粒（LNP）寄送的瞬时强调SaKKH-CBE3子系统之后，可致使近21%的载体校对并关键时刻了Pahenu2激素的结核病表型，同时也没有检验到以外核糖体组和以外基因组的脱靶校对。

上皮细胞激光颗粒（LNP）寄送的校对效率和安以外性结果，不输于疣无关病毒（AAV）表征。

通过上皮细胞激光颗粒(LNP)向激素肝脏膜里寄送SaKKH-CBE3子系统

综上所述，SaKKH-CBE3子系统在AAV或LNP抑制的肝脏膜寄送后的强调不仅能有效更换基因型物质基因型、关键时刻Pahenu2激素的结核病表型，还才会对肝脏膜细胞膜里的RNA和DNA造成实质性的非载体校对。这一发现支持了核苷酸双链图形化（CBE）在治疗增生肝脏膜结核病的可行性！

原始典故：

Chaolin Huang 1, Lixue Huang 2, Yeming Wang 3,et al.6-month consequences of COVID-19 in patients discharged from hospital: a cohort study.Lancet. 2021 Jan 16;397(10270):220-232. doi: 10.1016/S0140-6736(20)32656-8. Epub 2021 Jan 8.